ປັດໄຈແຊກແຊງໃນປະຕິກິລິຍາ PCR

ໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ PCR, ບາງປັດໃຈທີ່ແຊກແຊງມັກຈະພົບ.
ເນື່ອງຈາກຄວາມອ່ອນໄຫວສູງສຸດຂອງ PCR, ການປົນເປື້ອນກໍ່ຖືວ່າເປັນຫນຶ່ງໃນປັດໃຈສໍາຄັນທີ່ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຜົນໄດ້ຮັບ PCR ແລະສາມາດຜະລິດຜົນໃນທາງບວກທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ.
ທີ່ສໍາຄັນເທົ່າທຽມກັນແມ່ນແຫຼ່ງຕ່າງໆທີ່ນໍາໄປສູ່ຜົນໄດ້ຮັບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ. ຖ້າຫາກວ່າຫນຶ່ງຫຼືຫຼາຍພາກສ່ວນທີ່ສໍາຄັນຂອງການປະສົມ PCR ຫຼືປະຕິກິລິຍາການຂະຫຍາຍຕົວເອງໄດ້ຖືກຂັດຂວາງຫຼືແຊກແຊງ, ການບົ່ງມະຕິຂອງການບົ່ງມະຕິສາມາດຂັດຂວາງໄດ້. ນີ້ສາມາດນໍາໄປສູ່ການຫຼຸດຜ່ອນປະສິດທິພາບແລະຜົນໄດ້ຮັບທາງລົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ.
ນອກເຫນືອໄປຈາກການສະກັດກັ້ນ, ການສູນເສຍຄວາມສົມບູນຂອງອາຊິດນິວເຄຼຍເປົ້າຫມາຍອາດຈະເກີດຂື້ນຍ້ອນການຂົນສົ່ງແລະ / ຫຼືສະພາບການເກັບຮັກສາກ່ອນການກະກຽມຕົວຢ່າງ. ໂດຍສະເພາະ, ອຸນຫະພູມສູງຫຼືການເກັບຮັກສາທີ່ບໍ່ພຽງພໍອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເສຍຫາຍຂອງຈຸລັງແລະອາຊິດນິວເຄຼຍ. ການແກ້ໄຂແຕ່ລະຫ້ອງແລະເນື້ອເຍື່ອແມ່ນມີສາເຫດທີ່ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກຂອງການແບ່ງແຍກ DNA ແລະບັນຫາທີ່ບໍ່ມີຕົວຕົນ (ເບິ່ງຕົວເລກ 1 ແລະ 2). ໃນກໍລະນີເຫຼົ່ານີ້, ແມ່ນແຕ່ການໂດດດ່ຽວທີ່ດີທີ່ສຸດແລະການໃຫ້ບໍລິສຸດຈະບໍ່ຊ່ວຍໄດ້.

ຮູບ 1 | ຜົນກະທົບຂອງການ immobilization ສຸດ DNA FORGRITY
Gel Gel electrophoresis ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄຸນນະພາບຂອງ DNA ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກພາກສ່ວນ paraffin ແຕກຕ່າງກັນຫຼາຍ. DNA ຂອງຄວາມຍາວຂອງຊິ້ນສ່ວນສະເລ່ຍທີ່ແຕກຕ່າງກັນຢູ່ໃນສະກັດຈາກສານສະກັດຈາກວິທີການແກ້ໄຂ. DNA ຖືກຮັກສາໄວ້ໃນເວລາທີ່ກໍານົດໃນເວລາທີ່ກໍານົດໃນຕົວຢ່າງທີ່ແຊ່ແຂງແລະໃນຕົວຢ່າງທີ່ເປັນກາງທີ່ກໍາຈັດເປັນກາງ. ການນໍາໃຊ້ bouin ທີ່ເປັນກົດທີ່ແຂງແຮງຫຼືເປັນທີ່ບໍ່ມີປະໂຫຍດ, ຮູບແບບອາຊິດທີ່ມີສານອາຊິດທີ່ມີຢູ່ໃນການສູນເສຍຂອງ DNA. ສ່ວນທີ່ຍັງເຫຼືອແມ່ນມີສ່ວນປະກອບສູງ.
ຢູ່ເບື້ອງຊ້າຍ, ຄວາມຍາວຂອງຊິ້ນສ່ວນແມ່ນສະແດງອອກເປັນຄູ່ kilobase (KBP)

ຮູບທີ 2 | ການສູນເສຍຄວາມສົມບູນຂອງເປົ້າຫມາຍອາຊິດນິວເຄຼຍ
(ກ) ຊ່ອງຫວ່າງ 3'-5 'ທັງສອງສາຍຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການພັກຜ່ອນໃນ DNA ເປົ້າຫມາຍ. ການສັງເຄາະຂອງ DNA ຍັງຈະເກີດຂື້ນຢູ່ໃນຊິ້ນເລັກໆນ້ອຍໆ. ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຖ້າສະຖານທີ່ສໍານວນຫນຶ່ງຂອງ primer ແມ່ນຂາດຢູ່ໃນຊິ້ນສ່ວນ DNA, ມີແຕ່ຄວາມຂະຫຍາຍເສັ້ນເທົ່ານັ້ນ. ໃນກໍລະນີທີ່ເອື້ອອໍານວຍທີ່ສຸດ, ຊິ້ນສ່ວນຕ່າງໆອາດຈະນັ່ງຢູ່ນໍາກັນ, ແຕ່ວ່າຜົນຜະລິດຈະມີຂະຫນາດນ້ອຍແລະຕໍ່າກວ່າລະດັບການຊອກຄົ້ນຫາ.
(ຂ) ການສູນເສຍຖານນ້ໍາສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຍ້ອນການເກີດຂື້ນແລະການສ້າງຕັ້ງ dimidine ຂອງ thymidine, ນໍາໄປສູ່ຈໍານວນຂອງ H-Bonds ແລະການຫຼຸດລົງຂອງ TM. ໃນລະຫວ່າງໄລຍະທີ່ອົບອຸ່ນຍາວ, ຜູ້ປະກອບສ່ວນຈະຫາຍໄປຈາກ Matrix DNA ແລະຈະບໍ່ຢູ່ໃນສະພາບທີ່ເຂັ້ມງວດກວ່າເກົ່າ.
(c) ຖານຂໍ້ທີ່ຢູ່ຕິດກັນທີ່ຢູ່ຕິດກັນເປັນຕົວເລກ TT Dimer.
ບັນຫາທົ່ວໄປອີກຢ່າງຫນຶ່ງທີ່ມັກຈະເກີດຂື້ນໃນການບົ່ງມະຕິຂອງໂມເລກຸນແມ່ນການປ່ອຍຕົວທີ່ບໍ່ຄ່ອຍມີເປົ້າຫມາຍຫນ້ອຍກວ່າທີ່ສຸດຂອງອາຊິດນິວເຄຼຍທຽບກັບການຂຸດຄົ້ນ phenol-chloroform. ໃນກໍລະນີທີ່ຮ້າຍແຮງ, ສິ່ງນີ້ສາມາດພົວພັນກັບສິ່ງລົບກວນທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ. ເວລາຫຼາຍສາມາດໄດ້ຮັບການບັນທືກໂດຍການຕົ້ມ lysis ຫຼືການຍ່ອຍອາຫານ enzymation ຂອງເສດເຫຼືອຂອງເມັດ, ແຕ່ວິທີການນີ້ມັກຈະສົ່ງເສີມຄວາມອ່ອນໄຫວຂອງ PCR ຕ່ໍາ.

inhibition ຂອງກິດຈະກໍາ polynerase ໃນລະຫວ່າງການຂະຫຍາຍ

ໂດຍທົ່ວໄປ, ການຍັບຍັ້ງແມ່ນໃຊ້ເປັນແນວຄິດທີ່ເປັນພາບັນທຸກເພື່ອອະທິບາຍປັດໃຈທັງຫມົດທີ່ນໍາໄປສູ່ຜົນໄດ້ຮັບຂອງ PCR ທີ່ສັບສົນ. ໃນຄວາມຮູ້ສຶກທີ່ເຂັ້ມງວດ, ມີຈໍາກັດຕໍ່ກິດຈະກໍາຂອງ enzyme, IE
ສ່ວນປະກອບໃນຕົວຢ່າງຫຼືຜູ້ປ້ອງກັນປະເພດຕ່າງໆແລະສານສະກັດຈາກການປະສົມປະສານໂດຍກົງຫຼືດັກ cofactors (ເຊັ່ນ: ການນໍາໃຊ້ polymerase ຂອງມັນແລະເຮັດໃຫ້ເກີດຜົນໄດ້ຮັບຂອງ PCR ລົບ.
ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການຕິດຕໍ່ພົວພັນຫຼາຍຢ່າງລະຫວ່າງສ່ວນປະກອບຕິກິຣິຍາແລະອາຊິດທີ່ມີເປົ້າຫມາຍ - ມີການກໍານົດເປັນ 'pinr inhibitors'. ເມື່ອຄວາມຊື່ສັດຂອງຫ້ອງໄດ້ຖືກລົບກວນໂດຍການໂດດດ່ຽວແລະກົດ nucleic ແມ່ນປ່ອຍ, ລະຫວ່າງຕົວຢ່າງແລະໄລຍະການແກ້ໄຂອ້ອມຂ້າງແລະໄລຍະທີ່ແຂງແຮງ. ຍົກຕົວຢ່າງ, 'ຄົນຂີ້ເຫຍື້ອ' ສາມາດຜູກມັດ DNA ດຽວ - ຫຼື straight-strawed data ແລະແຊກແຊງດ້ວຍການໂດດດ່ຽວແລະການຊໍາລະລ້າງຈໍານວນເປົ້າຫມາຍທີ່ບັນລຸໄດ້ໃນທີ່ສຸດ.
ໂດຍທົ່ວໄປ, ຕົວຍັບຍັ້ງຂອງ PCR ມີຢູ່ໃນທາດແຫຼວໃນຮ່າງກາຍແລະທາດໂປຼຕີນຈາກເລືອດຈາງ (ນ້ໍາມັນ

ເຄື່ອງປັ່ນປ່ວນທີ່ມີຢູ່ໃນຕົວແທນຈໍາຫນ່າຍໃນເຊື້ອແບັກທີເຣຍແລະຈຸລັງ Eukaryotic, Non-Bust DNA DNA Matriceals ແລະອຸປະກອນຫ້ອງທົດລອງເຊັ່ນ: ຖົງຫ້ອງທົດລອງແລະພາດສະຕິກ. ການກັ່ນຕອງຂອງອາຊິດ nucleic ໃນລະຫວ່າງຫຼືຫຼັງຈາກການສະກັດເອົາແມ່ນວິທີການທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບການກໍາຈັດຕົວຍັບຍັ້ງ PCR ທີ່ກໍາຈັດ.
ໃນມື້ນີ້, ອຸປະກອນການສະກັດເອົາອັດຕະໂນມັດຕ່າງໆສາມາດທົດແທນໂປໂຕຄອນຄູ່ມືຫຼາຍ, ແຕ່ວ່າການຟື້ນຕົວແລະ / ຫຼືການເຮັດຄວາມສະອາດຂອງເປົ້າຫມາຍບໍ່ເຄີຍໄດ້ຮັບ. ຕົວຍັບຍັ້ງທີ່ມີທ່າແຮງຍັງຄົງມີຢູ່ໃນອາຊິດນິວເຄຼຍທີ່ບໍລິສຸດຫຼືອາດຈະມີຜົນດີແລ້ວ. ຍຸດທະສາດທີ່ແຕກຕ່າງກັນມີຢູ່ໃນການຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຂອງຕົວຍັບຍັ້ງ. ທາງເລືອກຂອງ polymerase ທີ່ເຫມາະສົມສາມາດມີຜົນກະທົບທີ່ສໍາຄັນຕໍ່ກິດຈະກໍາທີ່ຍັບຍັ້ງ. ວິທີການພິສູດອື່ນໆເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການຍັບຍັ້ງ PCR ແມ່ນເພີ່ມຂື້ນຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງໂພລີເອັສຫຼືການນໍາໃຊ້ສິ່ງເສບຕິດຕ່າງໆເຊັ່ນ: BSA.
ການສະກັດກັ້ນປະຕິກິລິຍາ PCR ສາມາດສະແດງໃຫ້ເຫັນໂດຍການນໍາໃຊ້ການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບຂອງຂະບວນການພາຍໃນ (IPC).
ຕ້ອງໄດ້ຮັບການດູແລເພື່ອກໍາຈັດການປະຕິເສດທັງຫມົດແລະວິທີແກ້ໄຂອື່ນໆໃນຊຸດສະກັດ, SDA, isopropanol, isopropanol, isopropanol, isopropanol, isopropanol ແລະ phenol, ຈາກຂັ້ນຕອນການລ້າງ nucleic ໂດຍຂັ້ນຕອນການລ້າງໂດຍສະເພາະ. ອີງຕາມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງພວກເຂົາ, ພວກເຂົາອາດຈະກະຕຸ້ນຫຼືຍັບຍັ້ງ PCR.