ຄູ່ມືວິທະຍາສາດລະດູຮ້ອນ: ເມື່ອຄື້ນຄວາມຮ້ອນ 40°C ພົບກັບການທົດລອງທາງໂມເລກຸນ

ອຸນຫະພູມສູງຍັງຄົງຢູ່ທົ່ວປະເທດຈີນໃນໄລຍະມໍ່ໆມານີ້. ໃນວັນທີ 24 ກໍລະກົດ, ຫໍສັງເກດການອຸຕຸນິຍົມວິທະຍາແຂວງຊານຕົງໄດ້ອອກການແຈ້ງເຕືອນອຸນຫະພູມສູງສີເຫຼືອງ, ໂດຍຄາດຄະເນວ່າອຸນຫະພູມ "ຄ້າຍຄືຫ້ອງຊາວນາ" ຈະຢູ່ທີ່ 35-37°C (111-133°F) ແລະຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ 80% ສຳລັບສີ່ມື້ຕໍ່ໄປໃນເຂດພາຍໃນ. ອຸນຫະພູມໃນສະຖານທີ່ຕ່າງໆເຊັ່ນ Turpan, Xinjiang, ກຳລັງເຂົ້າໃກ້ 48°C (111-133°F). Wuhan ແລະ Xiaogan, Hubei, ຢູ່ພາຍໃຕ້ການແຈ້ງເຕືອນສີສົ້ມ, ໂດຍມີອຸນຫະພູມເກີນ 37°C ໃນບາງພື້ນທີ່. ໃນຄວາມຮ້ອນທີ່ຮ້ອນແຮງນີ້, ໂລກຈຸລະທັດທີ່ຢູ່ໃຕ້ໜ້າດິນຂອງ pipettes ກຳລັງປະສົບກັບການລົບກວນທີ່ຜິດປົກກະຕິ - ຄວາມໝັ້ນຄົງຂອງກົດນິວເຄຼຍອິກ, ກິດຈະກຳຂອງເອນໄຊມ໌, ແລະສະພາບທາງກາຍະພາບຂອງສານປະຕິກິລິຍາລ້ວນແຕ່ຖືກບິດເບືອນຢ່າງງຽບໆໂດຍຄື້ນຄວາມຮ້ອນ.

ການສະກັດກົດນິວຄລີອິກໄດ້ກາຍເປັນການແຂ່ງຂັນກັບເວລາ. ເມື່ອອຸນຫະພູມພາຍນອກສູງກວ່າ 40°C, ເຖິງແມ່ນວ່າຈະເປີດເຄື່ອງປັບອາກາດ, ອຸນຫະພູມຂອງໂຕະປະຕິບັດການມັກຈະຢູ່ສູງກວ່າ 28°C. ໃນເວລານີ້, ຕົວຢ່າງ RNA ທີ່ປະໄວ້ໃນບ່ອນເປີດຈະເສື່ອມສະພາບໄວກວ່າສອງເທົ່າໃນລະດູໃບໄມ້ປົ່ງ ແລະ ລະດູໃບໄມ້ร่วง. ໃນການສະກັດລູກປັດແມ່ເຫຼັກ, ສານລະລາຍບັຟເຟີຈະອີ່ມຕົວຢູ່ໃນທ້ອງຖິ່ນເນື່ອງຈາກການລະເຫີຍຂອງຕົວລະລາຍທີ່ເລັ່ງຂຶ້ນ, ແລະຜລຶກຈະຕົກຕະກອນໄດ້ງ່າຍ. ຜລຶກເຫຼົ່ານີ້ຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການປ່ຽນແປງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນປະສິດທິພາບຂອງການດັກຈັບກົດນິວຄລີອິກ. ຄວາມລະເຫີຍຂອງຕົວລະລາຍອິນຊີເພີ່ມຂຶ້ນພ້ອມໆກັນ. ທີ່ 30°C, ປະລິມານການລະເຫີຍຂອງຄລໍໂຣຟອມເພີ່ມຂຶ້ນ 40% ເມື່ອທຽບກັບ 25°C. ໃນລະຫວ່າງການປະຕິບັດງານ, ມັນຈຳເປັນຕ້ອງຮັບປະກັນວ່າຄວາມໄວລົມໃນເຄື່ອງດູດຄວັນແມ່ນ 0.5 ແມັດ/ວິນາທີ, ແລະໃຊ້ຖົງມືໄນໄຕຣເພື່ອຮັກສາປະສິດທິພາບໃນການປ້ອງກັນ.

ການທົດລອງ PCR ປະເຊີນກັບການລົບກວນອຸນຫະພູມທີ່ສັບສົນຫຼາຍຂຶ້ນ. ສານເຄມີເຊັ່ນ: ເອນໄຊ Taq ແລະ reverse transcriptase ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວຫຼາຍຕໍ່ກັບການປ່ຽນແປງຂອງອຸນຫະພູມຢ່າງກະທັນຫັນ. ການກັ່ນຕົວຢູ່ຝາທໍ່ຫຼັງຈາກເອົາອອກຈາກຕູ້ແຊ່ແຂງ -20°C ສາມາດເຮັດໃຫ້ການສູນເສຍກິດຈະກຳຂອງເອນໄຊຫຼາຍກວ່າ 15% ຖ້າມັນເຂົ້າສູ່ລະບົບປະຕິກິລິຍາ. ວິທີແກ້ໄຂ dNTP ຍັງສາມາດສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງການເສື່ອມສະພາບທີ່ສາມາດກວດພົບໄດ້ຫຼັງຈາກພຽງແຕ່ 5 ນາທີຂອງການສຳຜັດກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງ (>30°C). ການເຮັດວຽກຂອງເຄື່ອງມືຍັງຖືກຂັດຂວາງໂດຍອຸນຫະພູມສູງ. ເມື່ອອຸນຫະພູມສະພາບແວດລ້ອມໃນຫ້ອງທົດລອງແມ່ນ >35°C ແລະຊ່ອງຫວ່າງການລະບາຍຄວາມຮ້ອນຂອງເຄື່ອງມື PCR ບໍ່ພຽງພໍ (<50 ຊມ ຈາກຝາ), ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງອຸນຫະພູມພາຍໃນສາມາດບັນລຸໄດ້ເຖິງ 0.8°C. ຄວາມຜິດປົກກະຕິນີ້ສາມາດເຮັດໃຫ້ປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍຢູ່ແຄມຂອງແຜ່ນ 96-well ຫຼຸດລົງຫຼາຍກວ່າ 40%. ຄວນເຮັດຄວາມສະອາດຕົວກອງຝຸ່ນເປັນປະຈຳ (ການສະສົມຂອງຝຸ່ນເຮັດໃຫ້ປະສິດທິພາບການລະບາຍຄວາມຮ້ອນຫຼຸດລົງ 50%), ແລະຄວນຫຼີກລ່ຽງການປັບອາກາດໂດຍກົງ. ນອກຈາກນັ້ນ, ເມື່ອປະຕິບັດການທົດລອງ PCR ໃນຕອນກາງຄືນ, ໃຫ້ຫຼີກລ່ຽງການໃຊ້ເຄື່ອງມື PCR ເປັນ "ຕູ້ເຢັນຊົ່ວຄາວ" ເພື່ອເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງ. ການເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມ 4°C ເປັນເວລາຫຼາຍກວ່າ 2 ຊົ່ວໂມງສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການກັ່ນຕົວຫຼັງຈາກຝາປິດທີ່ໃຫ້ຄວາມຮ້ອນປິດລົງ, ເຮັດໃຫ້ລະບົບປະຕິກິລິຍາເຈືອຈາງ ແລະ ອາດຈະເຮັດໃຫ້ໂມດູນໂລຫະຂອງເຄື່ອງມືເສື່ອມສະພາບ.

ເມື່ອປະເຊີນກັບຄຳເຕືອນກ່ຽວກັບອຸນຫະພູມສູງຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ຫ້ອງທົດລອງໂມເລກຸນກໍ່ຄວນສົ່ງສັນຍານເຕືອນໄພເຊັ່ນກັນ. ຕົວຢ່າງ RNA ທີ່ມີຄ່າຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນດ້ານຫຼັງຂອງຕູ້ແຊ່ແຂງ -80°C, ໂດຍມີການເຂົ້າເຖິງທີ່ຈຳກັດສະເພາະໄລຍະເວລາທີ່ມີອຸນຫະພູມສູງເທົ່ານັ້ນ. ການເປີດປະຕູຕູ້ແຊ່ແຂງ -20°C ຫຼາຍກວ່າຫ້າເທື່ອຕໍ່ມື້ຈະເຮັດໃຫ້ການປ່ຽນແປງຂອງອຸນຫະພູມຮ້າຍແຮງຂຶ້ນ. ອຸປະກອນທີ່ສ້າງຄວາມຮ້ອນສູງຕ້ອງການພື້ນທີ່ລະບາຍຄວາມຮ້ອນຢ່າງໜ້ອຍ 50 ຊມ ທັງດ້ານຂ້າງ ແລະ ດ້ານຫຼັງ. ນອກຈາກນັ້ນ, ແນະນຳໃຫ້ປັບໂຄງສ້າງເວລາທົດລອງຄືນໃໝ່: 7:00-10:00 ໂມງເຊົ້າ ສຳລັບການດຳເນີນງານທີ່ມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ອຸນຫະພູມ ເຊັ່ນ: ການສະກັດ RNA ແລະການໂຫຼດ qPCR; 13:00-16:00 ໂມງແລງ ສຳລັບວຽກງານທີ່ບໍ່ແມ່ນການທົດລອງ ເຊັ່ນ: ການວິເຄາະຂໍ້ມູນ. ຍຸດທະສາດນີ້ສາມາດປ້ອງກັນຈຸດສູງສຸດຂອງອຸນຫະພູມສູງຈາກການແຊກແຊງຂັ້ນຕອນທີ່ສຳຄັນໄດ້ຢ່າງມີປະສິດທິພາບ.

ການທົດລອງທາງໂມເລກຸນໃນລະຫວ່າງຄື້ນຄວາມຮ້ອນແມ່ນການທົດສອບທັງເຕັກນິກ ແລະ ຄວາມອົດທົນ. ພາຍໃຕ້ແສງແດດລະດູຮ້ອນທີ່ບໍ່ຢຸດຢັ້ງ, ບາງທີມັນອາດເຖິງເວລາທີ່ຈະວາງປິເປັດຂອງທ່ານລົງ ແລະ ຕື່ມກ່ອງນ້ຳກ້ອນເພີ່ມເຕີມໃສ່ຕົວຢ່າງຂອງທ່ານເພື່ອໃຫ້ເຄື່ອງມືກະຈາຍຄວາມຮ້ອນໄດ້ຫຼາຍຂຶ້ນ. ຄວາມເຄົາລົບນັບຖືຕໍ່ການປ່ຽນແປງຂອງອຸນຫະພູມນີ້ແມ່ນຄຸນນະພາບຫ້ອງທົດລອງທີ່ມີຄ່າທີ່ສຸດໃນຊ່ວງເດືອນລະດູຮ້ອນທີ່ຮ້ອນອົບເອົ້າ - ຫຼັງຈາກທີ່ທັງໝົດ, ໃນຄວາມຮ້ອນ 40°C ຂອງລະດູຮ້ອນ, ແມ່ນແຕ່ໂມເລກຸນກໍ່ຕ້ອງການ "ພາກພື້ນຂົ້ວໂລກທຽມ" ທີ່ຖືກປົກປ້ອງຢ່າງລະມັດລະວັງ.