ຄູ່ມືວິທະຍາສາດລະດູຮ້ອນ: ເມື່ອຄື້ນຄວາມຮ້ອນ 40 ອົງສາ C ພົບກັບການທົດລອງໂມເລກຸນ

​ເມື່ອ​ບໍ່​ດົນ​ມາ​ນີ້, ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ສູງ​ຍັງ​ຄົງ​ຢູ່​ທົ່ວ​ປະ​ເທດ​ຈີນ. ວັນ​ທີ 24 ກໍລະກົດ​ນີ້, ກົມ​ອຸຕຸນິຍົມ​ວິທະຍາ​ແຂວງ​ຊານ​ຕົງ​ໄດ້​ອອກ​ປະກາດ​ເຕືອນ​ໄພ​ອຸນຫະພູມ​ສູງ​ເປັນ​ສີ​ເຫຼືອງ, ​ໂດຍ​ຄາດ​ຄະ​ເນ​ວ່າ​ອຸນຫະພູມ​ໃນ​ລະດັບ 35-37°C (111-133°F) ​ແລະ ຄວາມ​ຊຸ່ມ​ຊື່ນ 80%. ອຸນຫະພູມຢູ່ໃນສະຖານທີ່ເຊັ່ນ: Turpan, Xinjiang, ໃກ້ຮອດ 48 ອົງສາ C (111-133 ° F). Wuhan ແລະ Xiaogan, Hubei, ພາຍໃຕ້ການເຕືອນໄພສີສົ້ມ, ອຸນຫະພູມສູງກວ່າ 37 ° C ໃນບາງພື້ນທີ່. ໃນຄວາມຮ້ອນອັນແຮງກ້ານີ້, ໂລກກ້ອງຈຸລະທັດພາຍໃຕ້ພື້ນຜິວຂອງທໍ່ທໍ່ນັ້ນກໍາລັງປະສົບກັບສິ່ງລົບກວນທີ່ຜິດປົກກະຕິ - ຄວາມຫມັ້ນຄົງຂອງອາຊິດນິວຄລີອິກ, ກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊ, ແລະສະພາບທາງດ້ານຮ່າງກາຍຂອງທາດ reagents ແມ່ນຖືກບິດເບືອນຢ່າງງຽບໆໂດຍຄື້ນຄວາມຮ້ອນ.

ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວເຄຼຍໄດ້ກາຍເປັນການແຂ່ງຂັນກັບເວລາ. ເມື່ອອຸນຫະພູມກາງແຈ້ງເກີນ 40 ອົງສາເຊ, ເຖິງແມ່ນວ່າຈະເປີດເຄື່ອງປັບອາກາດ, ອຸນຫະພູມຂອງຕາຕະລາງປະຕິບັດງານມັກຈະສູງກວ່າ 28 ອົງສາເຊ. ໃນເວລານີ້, ຕົວຢ່າງ RNA ທີ່ປະໄວ້ຢູ່ໃນການເຊື່ອມໂຊມທີ່ເປີດຫຼາຍກວ່າສອງເທົ່າໃນພາກຮຽນ spring ແລະດູໃບໄມ້ລົ່ນ. ໃນການສະກັດເອົາລູກປັດແມ່ເຫຼັກ, ການແກ້ໄຂ buffer ແມ່ນອີ່ມຕົວໃນທ້ອງຖິ່ນເນື່ອງຈາກການເລັ່ງການລະເຫີຍຂອງສານລະລາຍ, ແລະໄປເຊຍກັນແມ່ນ precipitated ໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍ. ໄປເຊຍກັນເຫຼົ່ານີ້ຈະເຮັດໃຫ້ການເຫນັງຕີງຂະຫນາດໃຫຍ່ໃນປະສິດທິພາບຂອງການຈັບອາຊິດ nucleic. ການເຫນັງຕີງຂອງສານລະລາຍອິນຊີເພີ່ມຂຶ້ນພ້ອມໆກັນ. ຢູ່ທີ່ 30 ° C, ປະລິມານການລະເຫີຍຂອງ chloroform ເພີ່ມຂຶ້ນ 40% ເມື່ອທຽບກັບ 25 ° C. ໃນ​ລະ​ຫວ່າງ​ການ​ດໍາ​ເນີນ​ງານ​, ມັນ​ຈໍາ​ເປັນ​ຕ້ອງ​ໄດ້​ຮັບ​ປະ​ກັນ​ວ່າ​ຄວາມ​ໄວ​ລົມ​ໃນ hood fume ແມ່ນ 0.5m/s​, ແລະ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້​ຖົງ​ມື nitrile ເພື່ອ​ຮັກ​ສາ​ປະ​ສິດ​ທິ​ພາບ​ການ​ປ້ອງ​ກັນ​.

ການທົດລອງ PCR ປະເຊີນກັບການລົບກວນອຸນຫະພູມທີ່ຊັບຊ້ອນຫຼາຍຂຶ້ນ. Reagents ເຊັ່ນ Taq enzyme ແລະ reverse transcriptase ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວທີ່ສຸດຕໍ່ການເຫນັງຕີງຂອງອຸນຫະພູມຢ່າງກະທັນຫັນ. ການຂົ້ນຂອງຝາທໍ່ຫຼັງຈາກເອົາອອກຈາກຕູ້ເຢັນ -20 ອົງສາ C ສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການສູນເສຍກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊຫຼາຍກວ່າ 15% ຖ້າມັນເຂົ້າໄປໃນລະບົບປະຕິກິລິຍາ. ວິທີແກ້ໄຂ dNTP ຍັງສາມາດສະແດງໃຫ້ເຫັນການເຊື່ອມໂຊມທີ່ກວດພົບໄດ້ຫຼັງຈາກພຽງແຕ່ 5 ນາທີຂອງການສໍາຜັດກັບອຸນຫະພູມຫ້ອງ (>30 ° C). ການດໍາເນີນງານຂອງເຄື່ອງມືຍັງຖືກຂັດຂວາງໂດຍອຸນຫະພູມສູງ. ເມື່ອອຸນຫະພູມສະພາບແວດລ້ອມຫ້ອງທົດລອງແມ່ນ>35°C ແລະການລະບາຍຄວາມຮ້ອນຂອງເຄື່ອງມື PCR ບໍ່ພຽງພໍ (<50 cm ຈາກຝາ), ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງອຸນຫະພູມພາຍໃນສາມາດບັນລຸໄດ້ເຖິງ 0.8°C. ການບ່ຽງເບນນີ້ສາມາດເຮັດໃຫ້ປະສິດທິພາບການຂະຫຍາຍຢູ່ຂອບຂອງແຜ່ນ 96 ດີຫຼຸດລົງຫຼາຍກວ່າ 40%. ການກັ່ນຕອງຂີ້ຝຸ່ນຄວນໄດ້ຮັບການອະນາໄມເປັນປົກກະຕິ (ການສະສົມຂອງຂີ້ຝຸ່ນຫຼຸດລົງປະສິດທິພາບການກະຈາຍຄວາມຮ້ອນ 50%), ແລະເຄື່ອງປັບອາກາດໂດຍກົງຄວນໄດ້ຮັບການຫຼີກເວັ້ນ. ນອກຈາກນັ້ນ, ເມື່ອປະຕິບັດການທົດລອງ PCR ຂ້າມຄືນ, ຫຼີກເວັ້ນການນໍາໃຊ້ເຄື່ອງມື PCR ເປັນ "ຕູ້ເຢັນຊົ່ວຄາວ" ເພື່ອເກັບຮັກສາຕົວຢ່າງ. ການເກັບຮັກສາຢູ່ທີ່ 4 ° C ເປັນເວລາຫຼາຍກວ່າ 2 ຊົ່ວໂມງສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການຂົ້ນຂຶນຫຼັງຈາກຝາປິດດ້ວຍຄວາມຮ້ອນ, ເຮັດໃຫ້ລະບົບປະຕິກິລິຍາເຈືອຈາງແລະອາດເຮັດໃຫ້ໂມດູນໂລຫະຂອງອຸປະກອນຖືກກັດ.

ປະເຊີນກັບການເຕືອນໄພອຸນຫະພູມສູງຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ຫ້ອງທົດລອງໂມເລກຸນຄວນສົ່ງສຽງເຕືອນ. ຕົວຢ່າງ RNA ທີ່ມີຄ່າຄວນຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ຢູ່ດ້ານຫຼັງຂອງຕູ້ແຊ່ເຢັນ -80 ອົງສາ C, ໂດຍມີການເຂົ້າເຖິງຖືກຈຳກັດໃຫ້ຢູ່ໃນຊ່ວງອຸນຫະພູມສູງ. ການເປີດປະຕູຕູ້ແຊ່ເຢັນ -20 ອົງສາ C ຫຼາຍກວ່າຫ້າເທື່ອຕໍ່ມື້ຈະເຮັດໃຫ້ການເໜັງຕີງຂອງອຸນຫະພູມຮ້າຍແຮງຂຶ້ນ. ອຸປະກອນສ້າງຄວາມຮ້ອນສູງຕ້ອງການພື້ນທີ່ລະບາຍຄວາມຮ້ອນຢ່າງຫນ້ອຍ 50 ຊຕມທັງສອງດ້ານແລະດ້ານຫລັງ. ນອກຈາກນັ້ນ, ແນະນໍາໃຫ້ປັບໂຄງສ້າງເວລາທົດລອງ: 7:00-10:00 AM ສໍາລັບການດໍາເນີນງານທີ່ລະອຽດອ່ອນຂອງອຸນຫະພູມເຊັ່ນການສະກັດເອົາ RNA ແລະການໂຫຼດ qPCR; ເວລາ 1:00-4:00 ໂມງແລງ ສໍາລັບວຽກງານທີ່ບໍ່ແມ່ນການທົດລອງເຊັ່ນ: ການວິເຄາະຂໍ້ມູນ. ຍຸດທະສາດນີ້ສາມາດປ້ອງກັນຈຸດສູງສຸດຂອງອຸນຫະພູມສູງຢ່າງມີປະສິດທິຜົນຈາກການແຊກແຊງຂັ້ນຕອນທີ່ສໍາຄັນ.

ການທົດລອງໂມເລກຸນໃນລະຫວ່າງຄື້ນຄວາມຮ້ອນແມ່ນການທົດສອບທັງເຕັກນິກແລະຄວາມອົດທົນ. ພາຍໃຕ້ແສງແດດໃນລະດູຮ້ອນທີ່ບໍ່ຢຸດຢັ້ງ, ບາງທີອາດເຖິງເວລາທີ່ຈະເອົາທໍ່ທໍ່ຂອງເຈົ້າລົງແລະຕື່ມໃສ່ກ່ອງໃສ່ນໍ້າກ້ອນໃສ່ຕົວຢ່າງຂອງເຈົ້າເພື່ອໃຫ້ເຄື່ອງມືລະບາຍຄວາມຮ້ອນໄດ້ຫຼາຍຂຶ້ນ. ຄວາມເຄົາລົບຕໍ່ການເໜັງຕີງຂອງອຸນຫະພູມນີ້ແມ່ນແນ່ນອນວ່າມີຄຸນນະພາບຫ້ອງທົດລອງທີ່ມີຄ່າທີ່ສຸດໃນຊ່ວງລະດູຮ້ອນທີ່ຮ້ອນແຮງ - ຫຼັງຈາກທີ່ທັງຫມົດ, ໃນຄວາມຮ້ອນ 40 ອົງສາ C ຂອງລະດູຮ້ອນ, ແມ່ນແຕ່ໂມເລກຸນຕ້ອງການ "ພາກພື້ນຂົ້ວໂລກທຽມ."