中文网站
ການວິເຄາະລະບົບຕ່ອງໂສ້ Polymerase (PCR) ແມ່ນເຄື່ອງມືທີ່ຈໍາເປັນໃນຊີວະວິທະຍາໂມເລກຸນ, ໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າຂະຫຍາຍ DNA ສໍາລັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຕ່າງໆຕັ້ງແຕ່ການຄົ້ນຄວ້າພັນທຸກໍາຈົນເຖິງການວິນິດໄສທາງດ້ານຄລີນິກ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບອຸປະກອນທີ່ສັບສົນ, ເຄື່ອງວິເຄາະ PCR ສາມາດພົບບັນຫາທີ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການປະຕິບັດຂອງມັນ. ບົດຄວາມນີ້ໄດ້ກ່າວເຖິງບາງຄໍາຖາມທົ່ວໄປກ່ຽວກັບເຄື່ອງວິເຄາະ PCRການແກ້ໄຂບັນຫາແລະສະຫນອງການແກ້ໄຂປະຕິບັດສໍາລັບບັນຫາທົ່ວໄປ.
1. ເປັນຫຍັງປະຕິກິລິຍາ PCR ຂອງຂ້ອຍບໍ່ຂະຫຍາຍອອກ?
ຫນຶ່ງໃນບັນຫາທົ່ວໄປທີ່ສຸດທີ່ຜູ້ໃຊ້ປະເຊີນຫນ້າແມ່ນຄວາມບໍ່ສາມາດຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR ເພື່ອຂະຫຍາຍ DNA ເປົ້າຫມາຍ. ນີ້ສາມາດເປັນປັດໃຈຈໍານວນຫນຶ່ງ:
ການອອກແບບ primer ບໍ່ຖືກຕ້ອງ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າ primers ຂອງທ່ານແມ່ນສະເພາະສໍາລັບລໍາດັບເປົ້າຫມາຍແລະມີອຸນຫະພູມການລະລາຍທີ່ເຫມາະສົມ (Tm). ໃຊ້ເຄື່ອງມືຊອບແວສໍາລັບການອອກແບບ primer ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຜູກມັດທີ່ບໍ່ສະເພາະ.
DNA ແມ່ແບບບໍ່ພຽງພໍ: ກວດສອບວ່າທ່ານກໍາລັງໃຊ້ DNA ແມ່ແບບຈໍານວນພຽງພໍ. ໜ້ອຍເກີນໄປຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ມີການຂະຫຍາຍໜ້ອຍ ຫຼືບໍ່ມີການຂະຫຍາຍ.
ຢາຍັບຍັ້ງໃນຕົວຢ່າງ: ສານປົນເປື້ອນໃນຕົວຢ່າງສາມາດຍັບຍັ້ງປະຕິກິລິຍາ PCR. ພິຈາລະນາການຊໍາລະ DNA ຂອງທ່ານຫຼືໃຊ້ວິທີການສະກັດເອົາທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.
ການແກ້ໄຂ: ກວດເບິ່ງການອອກແບບ primer ຂອງທ່ານ, ເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແມ່ແບບ, ແລະໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າຕົວຢ່າງຂອງທ່ານບໍ່ມີສານຍັບຍັ້ງ.
2. ເປັນຫຍັງຜະລິດຕະພັນ PCR ຂອງຂ້ອຍຈຶ່ງມີຂະຫນາດທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ?
ຖ້າຂະຫນາດຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR ຂອງທ່ານບໍ່ເປັນໄປຕາມທີ່ຄາດໄວ້, ມັນອາດຈະຊີ້ໃຫ້ເຫັນເຖິງບັນຫາກັບເງື່ອນໄຂຂອງປະຕິກິລິຍາຫຼືສ່ວນປະກອບທີ່ໃຊ້.
ການຂະຫຍາຍທີ່ບໍ່ສະເພາະ: ນີ້ສາມາດເກີດຂຶ້ນໄດ້ຖ້າ primer ຜູກມັດກັບເວັບໄຊທ໌ທີ່ບໍ່ໄດ້ຕັ້ງໃຈ. ກວດເບິ່ງຄວາມສະເພາະຂອງ primers ໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງມືເຊັ່ນ BLAST.
ອຸນຫະພູມ Annealing ບໍ່ຖືກຕ້ອງ: ຖ້າຫາກວ່າອຸນຫະພູມ annealing ແມ່ນຕ່ໍາເກີນໄປ, ການຜູກມັດທີ່ບໍ່ສະເພາະອາດຈະເປັນຜົນ. ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງອຸນຫະພູມ annealing ໂດຍ gradient PCR.
ການແກ້ໄຂ: ຢືນຢັນຄວາມສະເພາະຂອງ primer ແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບອຸນຫະພູມ annealing ເພື່ອປັບປຸງຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR.
3. ເຄື່ອງວິເຄາະ PCR ຂອງຂ້ອຍສະແດງຂໍ້ຄວາມຜິດພາດ. ຂ້ອຍຄວນເຮັດແນວໃດ?
ຂໍ້ຄວາມຜິດພາດໃນເຄື່ອງວິເຄາະ PCR ສາມາດເປັນຕາຕົກໃຈ, ແຕ່ພວກເຂົາມັກຈະສາມາດໃຫ້ຂໍ້ຄຶດຕໍ່ກັບບັນຫາທີ່ອາດຈະເກີດຂຶ້ນ.
ບັນຫາການປັບທຽບ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເຄື່ອງວິເຄາະ PCR ຖືກປັບຢ່າງຖືກຕ້ອງ. ການບໍາລຸງຮັກສາເປັນປົກກະຕິແລະການກວດສອບການປັບທຽບແມ່ນສໍາຄັນຕໍ່ການໄດ້ຮັບຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຖືກຕ້ອງ.
ກຸ່ມຊອບແວ: ບາງຄັ້ງ, ຂໍ້ຜິດພາດຂອງຊອບແວສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດບັນຫາ. ປິດເປີດຄອມພິວເຕີຂອງທ່ານຄືນໃໝ່ ແລະກວດເບິ່ງການອັບເດດຊອບແວ.
ການແກ້ໄຂ: ເບິ່ງຄູ່ມືຜູ້ໃຊ້ສໍາລັບລະຫັດຂໍ້ຜິດພາດສະເພາະ ແລະປະຕິບັດຕາມຂັ້ນຕອນການແກ້ໄຂບັນຫາທີ່ແນະນໍາ. ການບໍາລຸງຮັກສາເປັນປົກກະຕິສາມາດປ້ອງກັນບັນຫາຫຼາຍຢ່າງ.
4. ເປັນຫຍັງຜົນປະຕິກິລິຍາ PCR ຂອງຂ້ອຍບໍ່ສອດຄ່ອງ?
ຜົນໄດ້ຮັບ PCR ທີ່ບໍ່ສອດຄ່ອງສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມອຸກອັ່ງສໍາລັບເຫດຜົນຫຼາຍຢ່າງ:
ຄຸນນະພາບຂອງ Reagent: ຮັບປະກັນວ່າທາດ reagents ທັງໝົດ, ລວມທັງ enzymes, buffers, ແລະ dNTPs, ແມ່ນສົດ ແລະ ມີຄຸນນະພາບສູງ. ທາດປະສົມທີ່ໝົດອາຍຸ ຫຼື ປົນເປື້ອນອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດການປ່ຽນແປງ.
Thermal Cycler Calibration: ການຕັ້ງຄ່າອຸນຫະພູມທີ່ບໍ່ສອດຄ່ອງອາດຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຂະບວນການ PCR. ກວດສອບການປັບທຽບຂອງເຄື່ອງຈັກລະບາຍຄວາມຮ້ອນເປັນປະຈຳ.
ການແກ້ໄຂ: ການນໍາໃຊ້ reagents ຄຸນນະພາບສູງແລະ calibrate cycler ຄວາມຮ້ອນຂອງທ່ານເປັນປົກກະຕິເພື່ອຮັບປະກັນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ສອດຄ່ອງ.
5. ວິທີການປັບປຸງປະສິດທິພາບຕິກິຣິຍາ PCR?
ການປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR ສາມາດນໍາໄປສູ່ຜົນຜະລິດທີ່ສູງຂຶ້ນແລະຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຫນ້າເຊື່ອຖືຫຼາຍຂຶ້ນ.
ປັບເງື່ອນໄຂການຕິກິຣິຍາໃຫ້ເໝາະສົມ: ທົດລອງໃຊ້ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ primers ທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ແມ່ແບບ DNA ແລະ MgCl2. ແຕ່ລະປະຕິກິລິຍາ PCR ອາດຈະຕ້ອງການເງື່ອນໄຂທີ່ເປັນເອກະລັກສໍາລັບການປະຕິບັດທີ່ດີທີ່ສຸດ.
ໃຊ້ enzymes ທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດສູງ: ຖ້າຄວາມຖືກຕ້ອງແມ່ນສໍາຄັນ, ພິຈາລະນານໍາໃຊ້ DNA polymerase ທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດສູງເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຜິດພາດໃນລະຫວ່າງການຂະຫຍາຍ.
ການແກ້ໄຂ: ດໍາເນີນການທົດລອງການເພີ່ມປະສິດທິພາບເພື່ອຊອກຫາເງື່ອນໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການຕິດຕັ້ງ PCR ສະເພາະຂອງທ່ານ.
ສະຫຼຸບ
ການແກ້ໄຂບັນຫາ ກເຄື່ອງວິເຄາະ PCRສາມາດເປັນວຽກທີ່ໜ້າຢ້ານກົວ, ແຕ່ການເຂົ້າໃຈບັນຫາທົ່ວໄປ ແລະການແກ້ໄຂຂອງພວກມັນສາມາດເສີມຂະຫຍາຍປະສົບການ PCR ຂອງທ່ານໄດ້ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ໂດຍການແກ້ໄຂບັນຫາທົ່ວໄປເຫຼົ່ານີ້, ນັກຄົ້ນຄວ້າສາມາດປັບປຸງຜົນໄດ້ຮັບ PCR ແລະຮັບປະກັນຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຫນ້າເຊື່ອຖືໃນຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຊີວະສາດໂມເລກຸນ. ການບໍາລຸງຮັກສາເປັນປົກກະຕິ, ການຄັດເລືອກລະມັດລະວັງຂອງ reagents, ແລະການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງເງື່ອນໄຂຕິກິຣິຍາແມ່ນກຸນແຈສໍາລັບການວິເຄາະ PCR ສົບຜົນສໍາເລັດ.
ເວລາປະກາດ: ຕຸລາ-11-2024
ການຕັ້ງຄ່າຄວາມເປັນສ່ວນຕົວ