ການແກ້ໄຂບັນຫາ PCR: ຄໍາຖາມແລະວິທີແກ້ໄຂທີ່ຖືກຖາມເລື້ອຍໆ

ການປະຕິກິລິຍາລະບົບຕ່ອງໂສ້ Polymerase ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ເຊັ່ນ: ອຸປະກອນທີ່ສັບສົນໃດໆ, ນັກວິເຄາະ PCR ສາມາດພົບບັນຫາທີ່ສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຜົນງານຂອງມັນ. ບົດຂຽນນີ້ເວົ້າເຖິງບາງຄໍາຖາມທົ່ວໄປກ່ຽວກັບເຄື່ອງກວດ PCRການແກ້ໄຂບັນຫາແລະສະຫນອງວິທີແກ້ໄຂຕົວຈິງຕໍ່ບັນຫາທົ່ວໄປ.

1. ເປັນຫຍັງປະຕິກິລິຍາ PCR ຂອງຂ້ອຍຈຶ່ງບໍ່ແມ່ນ?

ຫນຶ່ງໃນບັນຫາທົ່ວໄປທີ່ສຸດທີ່ຜູ້ໃຊ້ປະເຊີນກັບຄວາມບໍ່ສາມາດຂອງປະຕິກິລິຍາຂອງ PCR ເພື່ອຂະຫຍາຍ DNA ເປົ້າຫມາຍ. ນີ້ສາມາດໄດ້ຮັບການສະແດງໃຫ້ເຫັນຫຼາຍປັດໃຈ:

ການອອກແບບ primer ທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າຮອງຂອງທ່ານແມ່ນສະເພາະເຈາະຈົງສໍາລັບລໍາດັບເປົ້າຫມາຍແລະມີອຸນຫະພູມລະລາຍທີ່ດີທີ່ສຸດ (TM). ໃຊ້ເຄື່ອງມືຊອບແວສໍາລັບການອອກແບບ Primer ເພື່ອຫລີກລ້ຽງການຜູກມັດທີ່ບໍ່ມີຄວາມຫມາຍ.

ແມ່ແບບ DNA ທີ່ບໍ່ພຽງພໍ: ກວດສອບວ່າທ່ານກໍາລັງໃຊ້ DNA ຂອງແມ່ແບບພຽງພໍ. ນ້ອຍເກີນໄປຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ອ່ອນແອຫຼືບໍ່ມີການຂະຫຍາຍ.

ຕົວຢ່າງໃນຕົວຢ່າງ: ການປົນເປື້ອນໃນຕົວຢ່າງສາມາດຍັບຍັ້ງຕິກິລິຍາ PCR. ພິຈາລະນາຮັບຄວາມສະອາດ DNA ຂອງທ່ານຫຼືໃຊ້ວິທີການສະກັດເອົາທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.

ວິທີແກ້ໄຂ: ກວດເບິ່ງການອອກແບບ primer ຂອງທ່ານ, ເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງແມ່ແບບ, ແລະໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າຕົວຢ່າງຂອງທ່ານບໍ່ມີຕົວຍັບຍັ້ງ.

2. ເປັນຫຍັງຜະລິດຕະພັນ PCR ຂອງຂ້ອຍຂະຫນາດທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ?

ຖ້າຂະຫນາດຜະລິດຕະພັນ PCR ຂອງທ່ານບໍ່ໄດ້ຮັບ, ມັນອາດຈະສະແດງໃຫ້ເຫັນບັນຫາກ່ຽວກັບເງື່ອນໄຂປະຕິກິລິຍາຫຼືສ່ວນປະກອບທີ່ນໍາໃຊ້.

ຂະຫຍາຍຕົວທີ່ບໍ່ແມ່ນສະເພາະ: ສິ່ງນີ້ສາມາດເກີດຂື້ນໄດ້ຖ້າຫາກວ່າ primer binds ກັບເວັບໄຊທ໌ທີ່ບໍ່ໄດ້ຕັ້ງໃຈ. ກວດເບິ່ງສະເພາະຂອງສະມາຊິກໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງມືເຊັ່ນ: ລະເບີດ.

ອຸນຫະພູມທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງ: ຖ້າອຸນຫະພູມຂອງໂລກເອອັກເສບແມ່ນມີຄວາມຕ່ໍາເກີນໄປ, ບໍ່ມີຜົນບັງຄັບໃຊ້ສະເພາະ. ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງອຸນຫະພູມ annaling ໂດຍ PCDIENT PCR.

ວິທີແກ້ໄຂ: ຢືນຢັນຄວາມສາມາດພິເສດຂອງຕົ້ນສະເພາະແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບໃນການຕັ້ງອາກອນ anNEALING ເພື່ອປັບປຸງຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງຜະລິດຕະພັນ PCR.

3. ນັກວິເຄາະ PCR ຂອງຂ້ອຍສະແດງຂໍ້ຄວາມຜິດພາດ. ຂ້ອຍຄວນເຮັດແນວໃດ?

ຂໍ້ຄວາມຜິດພາດໃນການກວດສອບ PCR ສາມາດເປັນຕາຕົກໃຈ, ແຕ່ພວກມັນມັກຈະສະຫນອງຂໍ້ຄຶດໃນບັນຫາທີ່ອາດເກີດຂື້ນ.

ບັນຫາການສອບທຽບ: ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າເຄື່ອງກວດ PCR ຖືກສອບທຽບຢ່າງຖືກຕ້ອງ. ການບໍາລຸງຮັກສາບໍາລຸງຮັກສາແລະການສອບເສັງແບບປົກກະຕິແມ່ນສໍາຄັນໃນການໄດ້ຮັບຜົນທີ່ຖືກຕ້ອງ.

ກຸ່ມຊອບແວ: ບາງຄັ້ງ, ຂໍ້ບົກພ່ອງຂອງຊອບແວສາມາດກໍ່ໃຫ້ເກີດບັນຫາ. Restart ຄອມພິວເຕີຂອງທ່ານແລະກວດສອບການປັບປຸງຊອບແວ.

ວິທີແກ້ໄຂ: ອີງໃສ່ປື້ມຄູ່ມືຜູ້ໃຊ້ສໍາລັບລະຫັດຂໍ້ຜິດພາດສະເພາະແລະປະຕິບັດຕາມຂັ້ນຕອນທີ່ແນະນໍາທີ່ແນະນໍາ. ການບໍາລຸງຮັກສາເປັນປະຈໍາສາມາດປ້ອງກັນຫລາຍບັນຫາ.

4. ເປັນຫຍັງຜົນໄດ້ຮັບປະຕິກິລິຍາ PCR ຂອງຂ້ອຍຈຶ່ງບໍ່ສອດຄ່ອງ?

ຜົນໄດ້ຮັບ PCR ທີ່ບໍ່ສອດຄ່ອງສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມອຸກໃຈສໍາລັບເຫດຜົນຫຼາຍຢ່າງ:

ຄຸນນະພາບຂອງ reagnent: ຮັບປະກັນວ່າທຸກໆ reagents, ລວມທັງ enzymes, buffers, ແລະ dretps, ແມ່ນສົດແລະມີຄຸນນະພາບສູງ. ຜູ້ຊ່ວຍເຫຼືອທີ່ຫມົດອາຍຸຫຼືປົນເປື້ອນອາດຈະເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມແຕກຕ່າງກັນ.

ການສອບທຽບວົງຈອນຄວາມຮ້ອນ: ການຕັ້ງອຸນຫະພູມທີ່ບໍ່ປ່ຽນແປງອາດຈະສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຂະບວນການ PCR. ກວດກາຄືນການສອບທຽບຂອງວົງຈອນຄວາມຮ້ອນ.

ວິທີແກ້ໄຂ: ໃຊ້ reagents ທີ່ມີຄຸນນະພາບສູງແລະ calibrate canconer ຄວາມຮ້ອນຂອງທ່ານເປັນປະຈໍາເພື່ອຮັບປະກັນຜົນທີ່ສອດຄ່ອງ.

.. ວິທີການປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງ PCR ຕິກິຣິຍາ?

ການປັບປຸງປະສິດຕິຜົນຂອງປະຕິກິລິຍາ PCR ສາມາດນໍາໄປສູ່ຜົນຜະລິດທີ່ສູງຂື້ນແລະຜົນໄດ້ຮັບທີ່ຫນ້າເຊື່ອຖືກວ່າ.

ເພີ່ມປະສິດທິພາບເງື່ອນໄຂການຕິກິຣິຍາ: ທົດລອງໃຊ້ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງສະມາຊິກ, ແມ່ແບບ DNA ແລະ Mgcl2. ແຕ່ລະປະຕິກິລິຍາ PCR ອາດຈະຕ້ອງມີເງື່ອນໄຂທີ່ເປັນເອກະລັກສໍາລັບການປະຕິບັດທີ່ດີທີ່ສຸດ.

ໃຊ້ Enzymes ທີ່ມີຄວາມຊື່ສັດສູງ: ຖ້າຄວາມຖືກຕ້ອງແມ່ນສໍາຄັນ, ພິຈາລະນາໂດຍໃຊ້ polymerase DNA ທີ່ມີຄວາມຊື່ສຽງສູງເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຜິດພາດໃນລະຫວ່າງການຂະຫຍາຍຕົວ.

ວິທີແກ້ໄຂ: ປະຕິບັດການທົດລອງທີ່ດີທີ່ສຸດເພື່ອຊອກຫາເງື່ອນໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດສໍາລັບການຕັ້ງຄ່າ PCR ສະເພາະຂອງທ່ານ.

ໃນບົດສະຫຼຸບ

ການແກ້ໄຂບັນຫາ aເຄື່ອງກວດ PCRສາມາດເປັນວຽກທີ່ຫນ້າຢ້ານກົວ, ແຕ່ເຂົ້າໃຈບັນຫາທົ່ວໄປແລະວິທີແກ້ໄຂຂອງພວກເຂົາສາມາດເສີມຂະຫຍາຍປະສົບການ PCR ຂອງທ່ານຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ໂດຍການແກ້ໄຂບັນຫາທົ່ວໄປເຫຼົ່ານີ້, ນັກຄົ້ນຄວ້າສາມາດປັບປຸງຜົນໄດ້ຮັບ PCR ແລະຮັບປະກັນຜົນທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ໃນການນໍາໃຊ້ຊີວະສາດໂມເລກຸນ. ການບໍາລຸງຮັກສາເປັນປະຈໍາ, ການຄັດເລືອກປະຕິກິລິຍາເປັນປະຈໍາ, ແລະການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງເງື່ອນໄຂການປະຕິກິລິຍາແມ່ນຄີທີ່ຈະວິເຄາະ PCR ທີ່ປະສົບຜົນສໍາເລັດ.